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立博国际，立博官网，立博国际官网，立博指数，立博威廉，立博球探，立博论坛，立博网址-饮用天然矿泉水:粪链球菌检验方法及结果分析

张辉
录入时间:2021-9-1 14:53:10 来源：青岛海博生物

一、大肠菌群简介：
粪肠球菌根据最新分类原则又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原，根据兰氏（Lancefield）血清学分类，可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。
粪肠球菌（Enterococcus faecalis）是革兰氏阳性，过氧化氢阴性球菌，是人和动物肠道内主要菌群之一，其能产生天然抗生素，有利于机体健康；同时还能产生细菌素等抑菌物质，抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长，改善肠道微环境；还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖，减少肠道尿素酶和内毒素的含量，使血液中氨和内毒素的含量下降。

粪肠球菌作为一种益生菌，在医学和食品工程领域得到广泛应用。另外，肠球菌为消化道内正常存在的一类微生物，在肠黏膜具有较强的耐受和定植能力，并且是一种兼性厌氧的乳酸菌，与厌氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比，更适合于生产和应用。

二、参考标准：

《GB8538-2016 饮用天然矿泉水：粪链球菌检验》

三、检验原理：

采用滤膜法，将250mL水样用孔径为0.45μm的滤膜过滤，并将滤膜移至KF链球菌琼脂培养基上，于36℃±1℃恒温箱中培养48h，如果有红色或粉红色菌落生长，需将菌落接种于脑-心浸萃琼脂培养基上做进一步的确证试验，如过氧化氢酶反应为阴性，并能在脑-心浸萃琼脂培养基上于45℃培养后生成菌落，则证实粪链球菌的存在，其立博球探论坛结果为阳性。

四、检验方法以及结果分析：

粪链球菌检验程序见图1。

图1 粪链球菌检验程序

4.1 推测性检验：
4.1.1 水样过滤:
应根据水质污染情况确定水样的稀释倍数，以滤过一张无菌滤膜后能产生20~100个菌落为宜，每张滤膜过滤250mL水样或稀释液。
在100级的洁净工作台进行过滤操作。首先用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，滤膜经过滤后应直接转移到KF链球菌琼脂培养基上，同时避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡。
KF链球菌琼脂原理：䏡胨和酵母粉提供氮源、维生素和生长因子；麦芽糖和乳糖为可发酵糖类；氯化钠维持均衡的渗透压；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌；琼脂是培养基的凝固剂；溴甲酚紫为指示剂染料；粪链球菌能将氯化三苯基四氮唑还原成一种酸性的偶氮染料，显示为深红色菌落。

使用方法：称取本品69.4g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，煮沸至完全溶解，冷却至50-60℃时，加入无菌1% TTC溶液10mL，混匀，倾入无菌平皿，备用。

4.1.2 培养：

将培养皿倒置，在36℃±1℃培养48h。

4.1.3 计数：

粪链球菌菌落在滤膜上呈现大小不等的红色或粉红色菌落。挑取不少于5个（不足5个则全挑）可疑菌落，进行革兰氏染色。镜检观察，粪链球菌应为革兰氏染色阳性球菌，常排列成短链状。根据菌落特征符合情况计数每250mL水样中的典型菌落数。

粪链球菌接种到KF链球菌琼脂平板，培养结果如下图所示：

图2 粪链球菌在KF链球菌琼脂平板上的菌落特征

4.2 确证性试验：
4.2.1 从滤膜上挑取典型的菌落，接种到脑-心浸萃琼脂培养基斜面上，在36℃±1℃培养24h~48h。如果有菌落生长，则继续按4.2.2和4.2.3的步骤进行。

粪链球菌接种到脑-心浸萃琼脂培养基斜面，培养结果如下图所示：

图3 粪链球菌在脑-心浸萃琼脂培养基斜面上的生长情况

A：粪链球菌；B：空白对照；

4.2.2 用接种环从脑-心浸萃琼脂培养基斜面上挑取典型培养物到一片清洁的载玻片上，加几滴新鲜配制的3%过氧化氢到载玻片的涂抹菌苔上，如果没有气泡发生，则显示过氧化氢酶反应为阴性，则菌落可视为可疑粪链球菌，需继续如下的确信过程。如果有气泡发生，则过氧化氢酶反应为阳性，因此菌落不属于粪链球菌，确信试验到此即可停止。

图4 粪链球菌过氧化氢酶试验结果

A：金黄色葡萄球菌；B：粪链球菌；

4.2.3 用接种环从脑-心浸萃琼脂培养基上转移一环培养物到脑-心浸萃液态培养基内，在45℃培养48 h。此外，也同时转移一环培养物到胆汁液态培养基中，在36℃±1℃培养3 d。胆汁液态培养基由40 mL无菌的100 g/L牛胆盐溶液加入60 mL无菌的脑-心浸萃液态培养基中配制而成。

粪链球菌接种到脑-心浸萃液态培养基和胆汁液态培养基中，培养结果如下图所示：

图5 粪链球菌在脑-心浸萃液态培养基和胆汁液态培养基中的生长情况

左：脑-心浸萃液态培养基；右：胆汁液态培养基；

A：粪链球菌；B：空白对照；

4.2.4 转移到上述培养基后，若能够生长繁殖，则结果表示为阳性，证实为粪链球菌。

4.3 结果与报告：

根据上述典型菌落的计数（4.1.3）和确证性试验为阳性的结果（4.2），计算每250mL水样中的粪链球菌数量，结果以CFU/250mL计。

KF链球菌琼脂-产品详情

http://www.fsjinsq.com/asphtml/product2953.htm

《GB 8538-2016 饮用天然矿泉水检验方法》 -标准下载

http://www.fsjinsq.com/biaozhun-download.asp?id=78

注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

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