立博国际，立博官网，立博国际官网，立博指数，立博威廉，立博球探，立博论坛，立博网址-弧菌的培养保存方法和菌悬液制备

许英俊
录入时间:2021-11-19 14:10:05 来源：青岛海博生物

一、弧菌简介
弧菌是一种可以在温带水环境下发现的细菌属。他们通常具有共同的特征和习性。如：
（1）革兰氏阴性，短小弯曲弧状，无芽孢，多数有鞭毛、菌毛（如图1）；
（2）具有一端单生鞭毛，运动迅速；
（3）多数菌株生长需要2%-3%氯化钠；
（4）最适生长温度为30℃-37℃；
（5）对热敏感，90℃ 1min即可杀死，50℃ 20min或65℃ 5min也可达到杀菌效果；

（6）耐碱怕酸，1%醋酸或50%食醋中1min死亡。

图1 弧菌的显微形态

二、样品处理规定
对于可能含有弧菌的样品的保存和检验，各相关标准均作了规定：
（1）非冷冻样品采集后应立即置7℃～10℃冰箱保存，尽可能及早检验（GB4789.7-2013 食品微生物学检验副溶血性弧菌检验）；
（2）新鲜样品采集后应于3h内完成检验，若不能在规定时间内完成，则应将样品置于7℃～10℃条件下保存，并尽可能在24h内完成检验（GB4789.44-2020 食品微生物学检验创伤弧菌检验）；
（3）样品采集后应立即在7℃～10℃保存，24h内检验。如果样品需要冷冻，于-18℃保存，24h内检验。为了最大限度地保证弧菌的存活率，应避免样品与冰直接接触（SN/T 1022-2001 进出口食品中霍乱弧菌检验方法）。

通常来说，样品保存需放在4℃条件下，但弧菌检验标准中，对样品的保存条件，均要求7℃～10℃，特意避开了4℃，这是因为创伤弧菌在4℃条件下极易形成活而不可培养的状态（参考GB4789.44-2020 食品微生物学检验创伤弧菌检验）。

三、保存温度
基于弧菌对温度的敏感性，实验室在保存弧菌的标准菌株的时候，也要注意温度条件。对于储备菌株，有条件的可以保存在-70℃超低温冰箱中，一般室温指25℃左右，因为白天晚上会有温差，除非有温控设备，否则没办法保证一般环境温度在25℃-28℃之间，其实只要温度不是太高，放在室内环境中短期内是没有问题的。
对于真空冷冻干燥的菌株，未开封状态下于-20℃冰箱中至少可以保存2年。
对于工作菌株，本实验室在长期工作实践中发现，由于冬天室温偏低（不高于10℃），也不利于弧菌的保存。一周内所划平板，尽管也有尚存活的弧菌，但其活力已远不能满足试验可靠性需要，因此为能保证每次试验的可靠性，建议每次接菌都用前一天在3%NaCl TSA平板上划线培养所得的新鲜菌落；为保证试验的连续性，在试验阶段应该每天划平板培养；培养好的平板，用完后直接放回培养箱，当天下午下班前拿出灭菌丢弃。

务必记住，弧菌液体试管和划线后的平板，一定不能放置在4℃冰箱中。

四、纯化培养与菌悬液制备
因为多数弧菌具有嗜盐性，而在无盐的环境中生长不好甚至不生长，因此在培养该菌时，通常需要加入2%-3%的NaCl，而在初步筛选出该菌后进行纯化时，各标准都要求用含3%NaCl的营养琼脂进行纯化，也是基于这个原因。
为方便副溶血性弧菌的鉴定，我公司开发出了副溶血性弧菌鉴定条和嗜盐试验立博国际官网生化管（编号分别为HBIS02、GS014、GS015、SN052、GS016），在使用这些产品时，需要挑取纯化的菌落做成菌悬液，再往管中滴加，此时需要注意，务必使用0.85%生理盐水进行菌悬液的制备，而不能用无菌纯净水，并且制成菌悬液后要尽快滴加完毕，否则会影响结果的判定。
试验证明，用生理盐水制备的菌液，放置1h后菌数降低至初始状态的50%左右；而用纯水制备的菌液，放置1小时几乎无活菌。即使稀释后立即涂布，纯水悬液中的菌数也会迅速降至生理盐水稀释液中菌数的10%以下（如图2）。

图2 副溶血性弧菌ATCC 17802用纯水和生理盐水稀释后放置不同时间后的菌数

综上所述，为保证菌种的存活，弧菌菌种应在-70℃超低温保存或室温，一定不能放在4℃环境保存；为保证试验结果的准确性，弧菌鉴定试验中，应该尽量用新鲜的菌板，挑单菌落至无菌生理盐水制成菌液，制成的菌液不宜搁置时间太长，必要时需要重新制备。

HBI副溶血性弧菌生化鉴定条(SN)-产品详情

http://www.fsjinsq.com/asphtml/product2349.htm

10%NaCl胰胨水-产品详情

http://www.fsjinsq.com/asphtml/product605.htm

8%NaCl胰胨水-产品详情

http://www.fsjinsq.com/asphtml/product3010.htm

6%NaCl胰胨水-产品详情

http://www.fsjinsq.com/asphtml/product3007.htm

3%NaCl胰胨水-产品详情

http://www.fsjinsq.com/asphtml/product616.htm

GB 4789.7-2013 副溶血性弧菌检验 -标准下载

http://www.fsjinsq.com/biaozhun-download.asp?id=33

GB 4789.44-2020 食品微生物学检验创伤弧菌检验 -标准下载

http://www.fsjinsq.com/biaozhun-download.asp?id=221

SNT1022-2010 进出口食品中霍乱弧菌的立博球探论坛方法 -标准下载

http://www.fsjinsq.com/biaozhun-download.asp?id=187

注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

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