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立博国际,立博官网,立博国际官网,立博指数,立博威廉,立博球探,立博论坛,立博网址-氧化酶试验的操作方法及注意要点

 许英俊
录入时间:2022-2-17 15:29:12 来源:青岛海博生物

一、试验简介

  氧化酶又名细胞色素氧化酶、细胞色素氧化酶c或呼吸酶。通过氧化酶试验可立博球探论坛细菌是否能产生该酶,主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别,前者为阴性,后者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。


二、试验原理

  氧化酶为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶,氧化酶先使细胞色素c氧化,然后此氧化型细胞色素c再使对苯二胺氧化,生成有颜色的化合物,从而表现为颜色反应。


三、试剂

  1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺。


四、试验方法

  常用方法有以下几种:

  (1)菌落法:直接滴加试剂于被检菌落上。具体操作为,取37℃培养20 h的斜面培养物一支,将2~3滴试剂从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂流经斜面上的培养物。如系平板培养物,则可将试剂滴在菌落上。

  (2)滤纸法:取一小块洁净滤纸,沾取少量菌,然后滴加试剂。

  (3)试剂纸片法:将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片,刮取菌苔涂于试剂纸上。

  其操作手法如图1所示:

图1  纸片法进行氧化酶试验的操作手法

  (4)拭子法:拭子应浸入试剂中,然后与可疑的分离菌落接触,在10秒钟内注意颜色的变化。

  (5)试管法:取18-24 h的营养肉汤(4.5mL)新鲜细菌培养物。加入试剂(0.2mL),摇动试管,以确保混合物充分混合,观察颜色变化。


五、试验结果

  细菌与试剂接触后,在10秒内呈深紫色,为强阳性;于2min内呈现蓝色者为阳性;阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均判为阴性结果。

  为保证结果准确性,分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希氏菌作阳性和阴性对照。


六、注意事项

  (1)进行测试时,试剂可能会自动氧化,因此使用新鲜试剂至关重要。为保证试剂新鲜,从配制到使用不应超过一周。

  (2)纯化菌时,要选择不含过多糖类的培养基,如营养琼脂和胰蛋白酶大豆琼脂。培养基中高浓度的葡萄糖会导致假阳性结果。

  (3)如果被测微生物在含有染料的培养基上生长,则结果可能会异常。

  (4)在将试剂添加到活性培养物中之前,请先将培养物进行传代培养,因为某些试剂会杀死微生物。

  (5)氧化酶测试有助于鉴定奈瑟菌以及鉴定和区分革兰氏阴性杆菌。为了确定被测生物的革兰氏反应和形态,应使用革兰氏染色进行检查。

  (6)刮取菌苔一定要使用铂金环、一次性塑料接种环或玻璃棒。使用包含铁的环可能会导致假阳性结果。

  (7)如果所用试剂或试剂条的敏感性较低,则可能会导致假阴性结果。

  (8)试纸条上滴加无菌水时,以刚刚浸湿为宜。若加水太多,会影响反应效果,延长反应时间,或无颜色反应,造成假阴性(如图2)。

左:10 uL              右:20 uL

图2  不同用量的无菌水对氧化酶试验结果的影响

  (9)确保用于氧化酶测试的菌落菌龄为18至24小时。较老的菌落,则会导致反应较弱甚至不反应(如图3)。

左:24h菌苔            右:2周菌苔

图3  不同菌龄的菌苔对氧化酶试验结果的影响


氧化酶试纸-产品详情

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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

 

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