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录入时间:2022-3-14 15:04:22 来源:现代微生物培养基和试剂手册

【原理】

  培养基中的牛肉浸汁,胰蛋白胨、䏡及䏡蛋白胨供给猪痢疾密螺旋体(T. I)营养,半胱氨酸为还原剂,可降低培养基的氧化还原电位,使适于T. I生长,刃天青(resazurin)为氧化还原指示剂,对T.I无毒性。它有-51mv的氧化还原电位(Eo),当Eo低至-110mv或更低时,其颜色由蓝到粉红色到完全无色,再氧化时刃天青变成粉红色而不转变成蓝色。


【成分】

每升牛肉浸汁中的成分:
胰蛋白胨
10g
胰蛋白䏡
5g
䏡蛋白胨
5g
L半胱氨酸
0.3g
磷酸氢二钾
1.5g
氯化钠
2.5g
刃天青(resazurin BDH)贮存液
1ml
(溶解10mg刃天青于10ml蒸馏水内配成贮存液)
灭活胎牛血清(通过0.22μm滤膜除菌)10%量加入

【制法】

  取经滤纸过滤并于-20℃保存的牛肉浸汁,置温水浴融化,悬浮上述各成分(除半胱氨酸及胎牛血清外)1L牛肉浸汁内,加温使完全溶解,然后煮沸直至指示剂退色,再稍快通入CO2遍于整个培养液中使发生气泡,以排除培养液中的氧气,再加入半胱氨酸,待溶解后,调至pH7.0±0.2,然后分装于中试管中,每支9ml,塞上棉塞后,118℃灭菌15分钟,取出后待冷至45℃左右,无菌加入除菌灭活胎牛血清1ml混匀后,马上供接种用。


【用途】

  作猪痢疾密螺旋体和无害密螺旋体的液体培养及生化鉴定用。


【注意事项】

  1.本培养基于灭菌待冷并经加入胎牛血清后,应迅速接种密螺旋体并置厌氧罐中培养。以免放置时间过长,空气中的氧气侵入培养基中(可由指示剂的颜色变化观察到,当液体表面出现粉红色层并逐渐增厚时,说明侵入培养液中的氧逐渐増多)而影响厌氧性密螺旋体的生长。

  2.一次用不完的培养基,则不加胎牛血清,并于灭菌后换上灭菌橡皮塞塞紧后保存。使用前再换上灭菌棉塞。如有一定量的氧气侵入,则重新置水浴中煮沸,再通入除菌无氧二氧化碳于培养基中,使产生气泡以排除培养基中的溶解氧后,再加入胎牛血清后使用。

  3.每支培养基接种密螺旋体时,需用铂耳刮取大量的菌苔接种3~4次,才能保证接种成功并能生长,且于接种后迅速置于含冷钯催化剂“105”及CO2 : H2=50:50的厌氧罐中培养。

  4.亦可将接种密螺旋体的试管培养基换以灭菌橡皮塞,并用带针头的大注射器迅速抽出其中空气经密封后,置普通温箱培养。

  5.如在本培养基中加入1%(W/V)糖类,则可作密螺旋体的发酵试验用。

 

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