6.14 氰化钾培养基(KCN)
6.14.1制备
蛋白胨 10.0g
氯化钠 5.0g
磷酸二氢钾 0.225g
磷酸氢二钠 5.64g
硝酸钾(无亚硝酸盐) 1.0g
5g/L氰化钾溶液 10.0mL
蒸馏水 1000.0mL
将蛋白胨、氯化钠和硝酸钾加入 900mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10 min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.6±0.1,高压灭菌121℃,15min,取出置于4℃冰箱内进行冷却。
将磷酸二氢钾、磷酸氢二钠溶于100 mL蒸馏水,高压灭菌121℃,15min,取出进行冷却。
在冷却后的上述培养液900mL中,以无菌操作加入磷酸盐缓冲液100mL和5g/L氰化钾溶液(必须用冷却的灭菌蒸馏水配制)10mL,摇混均匀(氰化钾的最终浓度为0.05 g/L)。并立即分装灭菌试管(12 mm×100mm),每管约1～1.5mL,同时加入约0.3mL灭菌石蜡油封盖。在4℃冰箱中可保存7d。
6.14.2 试验与判断
6.14.2.1制试剂
甲液：
氨基苯磺酸 0.8g
5 mol/L乙酸 100.0mL
乙液：
α-萘胺 0.5g
5 mol/L乙酸 100.0mL
6.14.2.2试验
在三糖铁琼脂斜面上挑取少量菌苔,先接种于吲哚培养基中,混匀(使其浓度近似于 37℃,24h肉汤培养物)然后烧灼接种环,再沾取吲哚培养基少许接种于氰化钾培养基中, 于37℃培养24±2h。培养之后,先观察培养液有无混浊,然后在每支氰化钾培养物试管内滴加甲液1滴,然后再滴加乙液1滴,摇匀。
6.14.2.3判断
强阳性反应为鲜红色,弱阳性为粉红色,在30～60 min内,强阳性可转为暗褐色。阴性无变化(加试剂前,培养液出现混浊,即有细菌生长,亦为阳性反应)。
6.15 丙二酸钠培养基(M)
酵母膏 1.0g
硫酸铵 2.0g
磷酸氢二钾 0.6g
磷酸二氢钾 0.4g
氯化钠 2.0g
丙二酸钠 3.0g
葡萄糖 0.25g
溴麝香草酚蓝 0.025g或5g/L溶液5 mL
蒸馏水 1000.0mL
除溴麝香草酚蓝外,将其他成分加入蒸馏水中搅拌均匀,静置约10 min,加热煮沸至完全溶解,调至pH6.9±0.1,加入溴麝香草酚蓝,再混匀,分装试管(12mm×100mm), 每管1～1.5mL,高压灭菌115℃,10min。
试验与判断：
接种大量幼嫩待试菌,于37℃培养24±2h,阳性反应为普蓝色；阴性不变色。
6.16 卫矛醇半固体琼脂(D)
蛋白胨 2.0g
酵母膏 1.0g
卫矛醇 10.0g
氯化钠 5.0g
磷酸氢二钾 0.3g
溴麝香草酚篮 0.08g或8g/L溶液10mL
琼 脂 2.5g
蒸馏水 1000.0mL
除溴麝香草酚蓝外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10 min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.1±0.1,加入溴麝香草酚篮,呈绿色,分装试管(12mm×100mm), in,灭菌后立即取出,冷却备用。
试验与判断：
穿刺接种待试菌,于37℃培养24±2h,阳性反应为黄色阴性不变色。
注：新制备的培养基均应用已知阳性及阴性菌进行测试,以保证培养基质量。每管约1～1.5mL,高压灭菌121℃,15m
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