羊膜腔感染综合征（IAIS）是导致围产儿病率、死亡率和产妇病率、死亡率升高的重要原因。引起IAIS的病原微生物很复杂,E.coli是最常见的需氧菌之一。本研究建立了晚孕SD大鼠E.coli宫内感染模型,通过母体静脉和羊膜腔内给予头孢曲松钠,比较两者胎盘组织IL26和MMP29的表达水平,探讨羊膜腔内给药对IAIS的治疗作用。
1 材料与方法
1.1 资料
所有动物由重庆医科大学实验动物中心提供。选择SPF级孕15dSD雌鼠36只,体质量300±10g,清洁喂养。取大肠埃希菌E.coli标准菌株ATCC25922菌株接种于LB平板上,37℃培养16～18h,挑取单个菌落接种于LB培养液中,37℃,60r/min细菌摇床过夜稀释至10（10）/L后使用。实验使用注射用头孢曲松钠山东鲁抗医药股份有限公司,批号C060611,1.0g/支。IL26、MMP29多克隆抗体于美国SantaCruz购进。
1.2 方法
1.2.1实验动物分组及处理：36只孕鼠完全随机分为4组,每组9只,根据国内外的报道并结合实验需要,所有孕鼠于妊娠第15天一侧宫角两胎囊间隙接种10（10）/L大肠埃希菌菌液0.2ml,成功建立了接种后1d的SD大鼠宫内感染模型,胎盘组织病理学检查显示炎症表现,羊水离心沉淀LB培养基划线培养阳性图1、2,各接种孕鼠在3d内无早产发生。于妊娠第16天给药,羊膜腔内给药组各孕鼠开腹行接种侧各胎囊穿刺,以无菌注射器回抽见羊水确认穿刺针进入羊膜腔内后各胎囊注射20mg/ml头孢曲松钠生理盐水溶液2mg/胎,以同法给予羊膜腔内对照组各孕鼠接种侧各胎囊生理盐水0.1ml后关腹。尾静脉给药组各孕鼠尾静脉注射100mg/ml头孢曲松钠生理盐水溶液60mg/只,尾静脉对照组各孕鼠同法给予生理盐水0.6ml。所有孕鼠接种、穿刺、给药、采集标本均采用无菌术,术前、术后清洁喂养,无饮食控制,在给药后连续3d内均无早产发生。分别于给药后1、2、3d,每天每组随机处死3只取材。
1.2.2 标本采集：断头处死孕鼠,随机抽取接种侧宫角顶端三个胎囊之一的胎盘胎膜组织分别置于4%多聚甲醛液固定后,经脱水、透明、浸蜡、包埋后切片。
1.2.3 指标观察：每张胎盘组织切片用S2P法行免疫组织化学染色,在高倍镜10×40下随机选择5个染色适中的视野进行拍照,所有图片应用Image2ProPlus5.0型病理影像多媒体图文操作系统测其阳性反应部位的平均光密度值,进行蛋白表达半定量分析。
1.3 统计学方法
结果以x±s表示,采用SPSS13.0统计软件进行方差分析和q检验。
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