(1)标本采取：采取濒死期疯动物或死于狂犬病患者尸体的延脑、海马回、脊髓和唾液腺，置灭菌容器，在冷藏条件下运送至实验室。如系唾液或脊髓液，则应低速离心后，取上清液，加入青霉素(1000U/ml)和链霉素(1000μg/ml)，并酌量加入灭活牛血清，约2%。标本的运送和保存，要求及时、冷藏，以保证诊断准确可靠。脑组织标本分作三份：一份作压印片，供显微镜和荧光抗体检查或酶联免疫吸附试验用；一份用10%甲醛溶液浸泡，作病理学检查；一份作病毒分离用。如果组织已经腐败变质，则只能作病毒分离。
(2)压印片检查：切取海马回，置吸水纸上，切面向上，用载玻片轻轻按压切面，制成压印标本，室温自然干燥后染色镜检——检查特异包涵体，即涅格里氏小体。染色时，在已固定的标本上滴加染色液(4%碱性复红饱和无水甲醇溶液3.5ml,2%美蓝饱和无水甲醇溶液15ml,无水甲醇35ml依次混合而成)数滴l8～10秒，流水冲洗，待干后镜检。涅格里氏小体位于神经细胞胞浆内，直径3～20μm不等，呈梭形、圆形或椭圆形，呈嗜酸性着染——鲜红色，但在其中常可见到嗜碱性(蓝色)小颗粒。神经细胞染成蓝色，间质呈粉红色，红细胞呈橘红色。如果检查小鼠脑内的包涵体，必须注意与其它病毒感染引起的胞浆内包涵体相区别，后者大小均匀，不象涅格里氏小体那样大小悬殊。检查狗脑时，应注意与偶而存在的犬瘟热病毒引起的包涵体区别。检出涅格里氏小体，即可诊断为狂犬病。但是必须指出，并非所有发病动物脑内都能找到包涵体。狗脑的阳性检出率为70%～90%，人脑约70%。
(3)荧光抗体检查：如上制造压印片2张，待干后，于-20℃用丙酮固定4小时后应用。高免血清是用固定毒多次接种家兔、豚鼠或绵羊而制备的。按常规法提取IgG，并标记荧光素，测定最适稀释度后应用。近年来常采用抗狂犬病毒单克隆抗体进行标记。病料检查通常按阻断对比法进行，即取3～5倍浓度的工作价荧光抗体(如某批荧光抗体的工作价为1：20稀释度，则取其4～7倍稀释液应用)，分装于2支小试管内，分别等量加入正常鼠脑悬液及狂犬病毒感染鼠脑悬液。37℃感作30分钟。中间振荡数次,此后离心沉淀,吸取上清液应用。分别滴加1～２滴于上述2张压印片上,37℃ 30分钟。用pH7.2PBS泡洗10分钟，然后用缓冲甘油封载后镜检。如果以正常鼠脑悬液吸收的荧光抗体染色的压印片呈特异性荧光(胞浆内亮黄绿色的荧光颗粒或荧光斑块)，而以感染鼠脑悬液吸收的荧光抗体染色的压印片不出现特异性荧光染色，即可确诊为狂犬病。也可以将脑组织印片或涂片或作病理切片，固定后，滴加荧光标记抗体，感作处理后镜检。如有翠绿色颗粒或斑块荧光即可确诊。此外，可以将特异性抗体包被在载体玻片上，用脑或唾液上清与抗体反应后，再用荧光抗体染色，镜检。还可采用间接荧光免疫技术进行立博球探论坛。荧光抗体检查必须设置已知阴、阳性标本对照,鉴定特异性。
(4)酶联免疫吸附试验：先用抗狂犬病毒阳性血清或IgG包被40孔板，加待测脑悬液，再用标记HRP的阳性IgG进行反应。亦可采用特异性抗体作为一抗与被检样品反应，然后再与酶标二抗进行反应。同时，设阳性及阴性抗原对照，如被测样品出现特异性显色，即可诊断为狂犬病。
上一篇：狂犬病控制
下一篇：狂犬病疫苗病毒分离
