感染了霍乱弧菌可能引起急性传染病——霍乱．1883年世界上霍乱大流行时，科克（Koch）在埃及的病人体内分离培养而且获得证实霍乱弧菌的存在。解放后在我国没有发现此疾病的流行。但由于病人的吐泻物可能污染水源，不能保证在辽阔的沿岸、港湾、河口等处没有霍乱菌的存在，因此对水源中霍乱弧菌的分离立博球探论坛，有利于预防霍乱疾病的发生。
1 ．培养基制备
（1）碱性蛋白胨水培养液：
NaNO3 2 克
NaCl 5 克
蛋白胨10 克
蒸馏水1000 毫升
将上述三种成分溶解于水后，用15%氢氧化钠溶液约10 毫升调pH 为8.8-9.0．于121℃下灭菌20 分钟。
（2）雪氏（Senenray ）蛋白胨水．
蛋白胨20克
NaCl 30 克
蒸馏水1000毫升
将前两种溶解于水．调pH8.4，于121℃ 蒸汽下灭菌20分钟。
（3）阿伦森氏（Aronson ）培养基：
3%肉膏琼脂（pH7.4-7.6) 100 毫升
10%无水Na2CO3溶液5-6 毫升
20%蔗糖溶液5毫升
20%糊精溶液3毫升
碱性复红酒精饱和溶液0.4 毫升
10 ％无水Na2SO3溶液2 毫升
制法如下：
① 将己灭菌的肉膏琼脂加热溶化加入碳酸钠溶液6 毫升混合。
② 加蔗糖、糊精、复红及亚硫酸钠溶液，混合，置于阿诺德氏灭菌器内，以间歇蒸汽灭菌15分钟，此时可有部分沉淀形成．
③ 将上层清晰的培养基倒于培养皿，制成平板，备用。但不得保存过久，一般在3 天内用完。
（4）亚碲酸钾蛋白胨水及亚碲酸钾琼脂平板成分及制法：
① 可溶性淀粉0.5克
蒸馏水10 毫升
将可溶性淀粉溶于蒸馏水混合，煮沸2 分钟（待淀粉透明即可）.
② 牛肉膏0.3-0.5克蛋白胨1 克
KNO3 0.1克
MgCl2 0.1克
NaCl 1 克
蒸馏水9O 毫升
③ 0.2%亚碲酸钾水溶液，用赛氏滤菌器过滤，或阿诺德氏灭菌器加热100℃ 30 分钟．
④ 制法；将② 中诸物混和加热至全部溶解，将① 全部加入，待冷至50-60℃ ，滴定pH 为9.2, （用0.04％溴麝香草酚蓝作指示剂），分装于三角瓶中每瓶100 毫升，112.6℃ 蒸汽下灭菌20 分钟。使用前每100毫升加入已灭菌的0.2%亚碲酸钾水溶液1 毫升及0.5%蔷薇酸酒精溶液l 毫升，混合后以无菌操作技术分装于无菌试管中，每管5-10 毫升．
如果制备固体培养基时，可在② 液内加2-3 %琼脂，其他各步与上述相同，最后倾入平皿，制成平板培养基．
2 ．增菌培养
取水样900 毫升加到内含5%氯化钠和10%碱性质白胨水的无菌混合液100 毫升（pH9.0）于37 ℃ 下培养24 小时。或取水样1-2升，在赛氏滤器上过滤，将其滤纸放于碱性蛋白水溶液、或放于雪氏蛋白胨水中作增菌培养24 小时．
3 ．分离培养
取少量的增菌培养液在阿伦森氏平板培养基上涂布接种．于37 ℃ 下培养12-24 小时。霍乱弧菌的菌落呈鲜红色，大肠杆菌群的菌落较小呈淡红色。
如果将增菌液涂布于亚蹄酸钾琼脂平板．在37 ℃ 下培养8-12 小时，由于其中蔷薇酸抑制革兰氏阳性细菌．亚碲酸钾抑制其他革兰氏阴性菌生长，仅霍乱弧菌能还原亚碲酸钾，形成黑色菌落。因此，这种培养基更适合于分离霍乱弧菌。
4 ．镜检
挑取典型菌落制片．染色镜检和悬滴镜检，若为革兰氏阴性，运动活泼的弧菌，则可初步确定所分离的是霍乱弧菌。
5 ．生理生化检验
根据霍乱弧菌的生理生化特征可分为四个生物类型，进行生理生化试验时可按2-8 的项目进行。
表2-8 霍乱弧菌四个生物型的特征区别
|
检验项目 |
生物型 |
|
|
|
|
|
霍乱型 |
埃尔托型 |
变形型 |
白色型 |
|
鞭毛数 |
1 |
1 |
1 |
1或多 |
|
溶血作用（管内） |
- |
d |
+ |
- |
|
甘露糖发酵 |
+ |
+ |
+ |
- |
|
阿拉伯糖发酵 |
- |
- |
- |
- |
|
蔗糖发酵 |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
V.P.于22℃ |
- |
+ |
d |
+ |
|
V.P.于37℃ |
d |
+ |
d |
+ |
|
M.R.于22℃ |
+ |
d |
d |
- |
|
M.R.于37℃ |
+ |
+ |
d |
d |
|
硝酸盐还原到硝酸盐 |
+ |
+ |
- |
+ |
|
吲哚产生（22℃） |
+ |
+ |
- |
(+)o |
|
吲哚产生（37℃） |
d |
d |
(+)o |
- |
|
赖氨酸脱羧反应 |
+ |
+ |
- |
+ |
|
37℃生长 |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
5℃生长 |
- |
- |
+ |
- |
|
42℃生长 |
d |
d |
- |
- |
|
在0%氯化钠生长 |
+ |
+ |
- |
+ |
|
在4%氯化钠生长 |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
在7%氯化钠生长 |
d |
d |
+ |
- |
|
在8%氯化钠生长 |
- |
- |
(+)o |
- |
|
pH为10生长 |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
pH为11生长 |
d |
d |
+ |
- |
|
霍乱红反应 |
+ |
+ |
- |
- |
|
发光 |
- |
- |
- |
+ |
注：d多种生化反应，(+)o为迟缓反应。+阳性反应，-阴性反应
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