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录入时间:2010-9-16 14:01:44 来源:互联网

日本灾后卫生检验产品-霍乱大肠杆菌分离培养基
一、构成(每升培养基)
酵母提取物…………………………………5g
细菌用胨……………………………………10g
硫代硫酸钠…………………………………10g
柠檬酸钠……………………………………10g
牛胆汁酸……………………………………8g
蔗糖…………………………………………20g
氯化钠………………………………………10g
柠檬酸二铁…………………………………1g
溴百里酚兰(BTB溶液)……………………0.04g
TB溶液 ………………………………………0.04g
琼脂……………………………………………14g
 
二、制作方法
将88g本品溶解在1L纯净水中,制成悬浮液,并加热至沸腾,然后将琼脂完全溶解其中。注意,本培养基不可经过高压蒸汽杀菌。冷却至50℃后,分别盛在浅盘里。
 
三、用途及特点
Kobayashi、enomoto、sakazaki和kuwahara等以nakanishi的选择分离琼脂培养基为基础,开发出了TCBS培养基。
本培养基的构成与kobayashi等的构成基本一样,但包含了经过特殊处理的牛的胆汁,改良了kobayashi与nakanishi等指出的不足。
由于本培养基的构成复杂,因此很难维持统一的发育标准。通过几个调查发现,不同厂家制造的TCBS培养基之间存在差别,不稳定因素。
通常,抑制肠内细菌的同时,对其部分同类不产生抑制的行为非常重要,因此,来自生产公司的质量管理显得尤为重要。West等试验证明,oxoid公司的TCBS培养基基本可以满足他们的产品标准。
WHO设定了由TCBS培养基中检出Vibrio类的最低适用标准。
本培养基适合vibrio choleae、v.parahaemolyticus等几乎所有vibrio类的发育。
几乎所有粪便中的肠内细菌都可以被抑制24小时。Proteus类以及streptococcus faecalis稍微有些发育,但是很容易区分出这些菌落与vibrio类菌落的不同。
本培养基不需要任何添加物或者血液无菌添加。因此,比起灭菌后仍需添加物的硫酸lauryl亚碲酸琼脂培养基,本培养基有很多优点。另外,比起亚碲酸培养基,本培养基具备适合vibrio类菌发育的特点。本培养基在阻止vibrio类菌之外的细菌发育的同时,在35℃环境下培养一晚可以促进病原弧菌属的迅速发育。从化学环境中分析其他vibrio类需要在更低温20~30℃的环境下培养。
TCBS培养基上成长的菌落形态
35℃环境下培养24小时后
一部分的aeromonas hydrophila发育成长为黄色菌落,而plesiomonas shigelloides通常通常情况下不发育。
方法
在本培养基表面涂抹粪便,或者由增菌培养基(如碱胨水)中涂抹。如果是临床检验,需要在35℃下培养18~24小时,如果是环境材料,需要在稍微低温环境下培养。
本培养基的培养结果显示,观察由培养器中取出的试验品,发现黄色的菌落就是弧菌群。例如,如果将v.chorela在室温下放置,会变回到绿色。
保存方法和使用期限
保存在30℃的干燥环境下,在使用期限内使用。制作的培养基需要保存在2~8℃温度下。
 
四、质量管理
阳性控制
Vibrio furnissii nctc 11218(非病原性)
阴性控制
Escherchia coli atcc 25922
 
五、注意事项
TCBS培养基上的各种vibrio类的鉴别属于推测,为了进一步证实,需要进行追加试验。
TCBS培养基上的黄色菌落不能进行氧化酶生化反应。由TCBS培养基钓菌出来的菌落有粘稠性,很难发生滑动凝集反应。进行滑动凝集反应之前,需要进行普通琼脂培养基的二次培养。

 

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