原理：有些细菌能分解含硫氨基酸，产生硫化氢（H2S），H2S会使培养基中的醋酸铅或氯化铁形成黑色的硫化铅或硫化铁。
方法1：醋酸铅琼脂法
培养基：
肉汤琼脂 100ml
10％硫代硫酸钠溶液（新配） 2.5ml
10％醋酸铅溶液 3ml
三种成份分别高压灭菌，前二者混合后待凉至60℃，加入醋酸铅溶液，混合均匀，无菌分装试管达5～6cm高，立即浸入冷水中，使冷凝成琼脂高层。
方法：用接种针蘸取纯培养物，沿管壁作穿刺，孵育于37℃ 1～2天后观察，必要时可延长5～7天。培养基变黑色者为阳性。
或将细菌培养于肉汤、肝浸汤琼脂斜面或血清葡萄糖琼脂斜面，在试管的棉花塞下方挂一约6.5×0.6cm2的浸蘸饱和醋酸铅溶液（10g醋酸铅溶于50毫升沸蒸馏水中即成）且已干燥的滤纸条，于37℃培养，观察7天，纸条变黑者为阳性结果。
方法2：三氯化铁明胶培养基法
培养基：
硫胨（Thiopeptone） 25g
明胶 120g
牛肉膏 7.5g
氯化钠 5g
蒸馏水加至 1000ml
上述成份灭菌后趁热加入5ml灭菌的10％氯化铁溶液。立即以无菌操作分装试管，达5～6cm高，迅速冷凝成高层。
方法：穿刺接种，培养于37℃观察7天，培养基变黑色者为阳性。
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