立博国际，立博官网，立博国际官网，立博指数，立博威廉，立博球探，立博论坛，立博网址-朊病毒的立博球探论坛（下）
录入时间:2012-7-16 8:50:48
来源：百度文库
3 借助特殊仪器的立博球探论坛方法
(1)电镜法：电镜立博球探论坛瘙痒病相关纤维(SAF)是朊病毒立博球探论坛的另外一种方法。现在认为PrPsc是SAF的组成成分。瘙痒病相关纤维为杆状、纤维状结构，其实是PrPsc在用去垢剂提取过程中，不同提取条件下形成的产物，感染生物体的组织切片中尚未发现SAF。基本步骤是：将被检组织置于10％N-laruoylsarcosine溶液中匀浆，差速离心、PK消化，重悬于蒸馏水中，负染，电镜观察。镜下可见两种瘙痒病特有的大分子纤维。电镜检查SAF灵敏度较低，不如免疫印迹方法。
(2)毛细管SDS-凝胶电泳：该法主要是通过理化方法--差速、超速离心，sodium N-lauroylsarcosine、PK处理，提纯PrPsc，然后在 Beckman P/ACE 5 500上进行毛细管SDS-凝胶电泳。根据各组分通过立博球探论坛器时，在214 nm波长处产生吸收峰的时间和峰形，鉴别出瘙痒病病原因子PrPsc。该法标本用量少，无需免疫学试剂，判断直观；缺点是需用超速离心机、专用毛细管电泳仪。
(3)荧光标记肽链的毛细管电泳免疫测定法：该法是根据免疫竞争原理测定，采用无区带毛细管电泳技术结合免疫荧光技术，立博球探论坛标本中微量的PrPse。其基本原理是将人工合成PrPsc特异性肽链(142～154)标记上荧光，然后与一定量的特异性抗体、羊脑提取物一起电泳，荧光标记的肽链与抗体结合后，迁移率发生改变，从而与游离的标记肽链分离开来，由于抗体的量只能结合大约50％的标记肽链，因而荧光标记的结合型肽链与游离型标记肽链的比例是固定的。当羊脑提取物中存在微量的PrPsc，由于其与标记肽链竞争结合抗体，导致结合型肽链与游离型肽链的比例发生改变，从而被仪器立博球探论坛出来。该方法灵敏度很高，能立博球探论坛到135 pg的PrPsc，可用于立博球探论坛朊病毒水平很低的脑外组织(如血液等)。
(4)双色强荧光目标扫描法：该法是运用共聚焦双色荧光相关分光镜技术立博球探论坛极其微量的朊病毒。其基本原理是利用致病性 PrPres，在适当条件下自我复制和自发聚集的特点，将重组PrP(rPrP)标记上绿色荧光，PrPres与正常构象的rPrP结合后，通过变构复制出大量的异常构象的rPrP盖。由于PrPres在一定条件下可自发聚集，从而使PrPres周围聚集了大量的rPrP盖，使其荧光强度超过游离的rPrP50倍。同时为了增强实验的特异性，又加入了标记上红色荧光的特异性单抗，使PrPres- rPrP盖聚集体又标记上红色荧光。只有同时发出高强度红、绿荧光的颗粒，才能被立博球探论坛仪器判为PrPres。
目前，朊病毒领域的许多方面对人类来说还有一片空白或知之甚少，如朊病毒突破种属屏障传播的程度，通过生物制品和临床医疗传播的危险性，其他传播途径的探知，以及朊病毒致病机制的研究等等，诸多方面的问题都离不开朊病毒的立博球探论坛，朊病毒立博球探论坛方法的发展必将为朊病毒的研究开辟广泛的前景。
上一篇：朊病毒的立博球探论坛（上）
下一篇：病毒的分类和特点
