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录入时间:2014-3-20 11:16:36 来源:海博生物

样品的运输与保存

储存和运输过程中保持样品温度在0 ℃~5 ℃。实验室接到样品后应尽快进行立博球探论坛。如果暂时不能立博球探论坛应将样品保存于-80℃冰箱中。

病毒的富集

无菌取样,在5 g检样中加入35 mL甘氨酸缓冲液(样品重量与缓冲液体积之比为1:7);组织匀浆器中高速匀浆3 min,充分破碎混匀。

将所有均质液转移到50 mL离心管中,37 ℃孵育30 min或室温下振荡30min;4 ℃,10000×g离心30 min。

取上清,加入10ml氯仿或更多,充分振摇,放置10min,中间振摇一次,4 ℃,10000×g离心30 min。

取上清至另一干净的100 mL离心管中,加入等体积的PEG 8000溶液(PEG终浓度为8%),上下颠倒离心管以充分混匀。

冰上放置至少1 h,4℃,10000×g离心5 min。弃去上清,保留沉淀。

病毒RNA的提取和纯化使用商品化的病毒RNA 提取试剂盒进行RNA 的提取和纯化,操作步骤请参考产品说明书。

为防止RNA 降解,所用实验用具及溶液应无RNA 酶,操作过程中应自始自终佩戴一次性橡胶或乳胶手套,并经常更换。

 

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