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1、将无菌棉试子蘸取无菌生理盐水，在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处5cm×5cm面积上，有顺序地均匀涂抹3次（一双鞋鞋为一份样品）后，用灭菌剪刀将棉试子手执部分剪断，将棉试子放入10mL装有玻璃珠的无菌盐水管中。

2、将盛有棉试子的盐水管在手心用力震荡100次，再用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉孢子充分散开。此液为1：10稀释液。

3、用灭菌吸管吸取1:10检液2ML，分别注入到2个灭菌平皿内,每皿1ML。令取1ML注入9ML加有玻璃珠的灭菌盐水管中，换一支1ML灭菌吸管吸吹5次，此液1:100稀释液。

4、按上述操作顺序作10倍稀释,每稀释一次,换一支1ML灭菌吸管,根据样品的污染情况,选择3个合适的稀释度。

  5、将溶化并冷却至45℃左右的培养基注入灭菌的平皿中,待琼脂凝固后,倒置于25～28 ℃温箱中，3天后开始观察，共培养观察一周。

  6、计算方法:通常选择菌落数在30～100之间的平皿进行计数,同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每毫升检样中所含真菌数。若有两个稀释度的菌落数皆在规定范围之间或三个稀释度皆不在此范围时,应参照细菌总数的报告方式报告。

7、结果报告：              m=n×k

     m-真菌菌落数，cfu/50cm2（一双拖鞋涂抹面积）

           n-每皿的平均真菌菌落数；

           k-稀释倍数；

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