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GBT5750.2-2006生活饮用水标准检验方法水样的采集和保存
GBT5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标
本文主要包含：
1.生活饮用水中的微生物指标
2.水样采集规则及注意事项
3.菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌的测定方法
4.对所立博球探论坛水样的综合分析
生活饮用水中的微生物指标
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项目 |
单位 |
限值 |
说明 |
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总大肠菌群 |
MPN/100ML 或 CFU/100ML |
不得检出 |
一般性污染 |
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耐热大肠菌群 |
MPN/100ML 或 CFU/100ML |
不得检出 |
指示粪便污染 |
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大肠埃希氏菌 |
MPN/100ML 或 CFU/100ML |
不得检出 |
指示粪便污染 |
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菌落总数 |
CFU/100ML |
100 |
一般性污染 |
菌落总数
水样在营养琼脂上有氧环境下，37℃培养48h后，所得1ml水样所含菌落的总数。
立博球探论坛意义:作为一般性污染的指标,即评价被检样品的微生物污染程度和安全性。水样菌落总数越多,说明水被微生物污染程度越严重,病原微生物存在的可能性越大,但不能说明污染的来源。
总大肠菌群
指一群在37℃培养24h能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
立博球探论坛意义:作为粪便污染的指标。水样总大肠菌群的含量,表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。
耐热大肠菌群
指一群在44-44.5℃培养24h能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。我国习惯上称之为“粪大肠菌群”。
微生物指标常规检验流程图
一、水样采集
采样原则：所采集的样品具有代表性。
采样容器:不能是新的污染源:不吸收或吸附某些待测组分不与待测组分发生反应。保证从采样到分析期间样品各组分的浓度不发生改变。
微生物样品必须按一般无菌操作的基本要求采集,并保证在运送、贮存过程中不受污染。
海博生物无菌水样采集袋
自来水水样:先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌再开放水龙头使水流5min(经常用水的水龙头放水1~3min)后,采集水样于无菌玻璃瓶,约占瓶容量80%,以便摇匀水样。
水源水水样:选有代表性的地点及可疑地方,一般距水面下10-15cm采集，采样后在水中改好盖子，再从水中取出。
注意事项
1.严格无菌操作。
2.做好标记:采得水样后应立即记录水样名称、地点、时间等内容。
3.从速送检。水样从采集到检验不应超过2h,在4℃下保存不应超过24h。
二、菌落总数测定
所需培养基和试剂：营养琼脂、9ml无菌生理盐水管
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自来水水样立博球探论坛
操作步骤：
1.以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样,注入灭菌平皿中。
2.倾注约15mL已融化井冷却到45℃左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇平皿,使水与培养基充分混匀（每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平只倾注营养琼脂养基作为空白对照）
3.待冷却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于36℃±1℃培养箱内培养48h,进行菌落计数,即为水样1mL中的菌落总数。
4.培养完成后，用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。
结果分析与报告:
计算平均菌落数，若菌落总数(cfu/ml)当检样的菌落数为1~100时,按实有数报告；大于100时,采用二位有效数字报告。
国家标准(GB5749-2006)规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超过100个。
水源水立博球探论坛
操作步骤：
1.以无操作方法吸取1mL充分混匀的水,注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:10稀释液。
2.吸取1:10的稀释液1ml，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:100稀师液,按同法依次稀释成1:1000,1:1000释液等备用（如此递增稀释一次,必须更换一支1m灭菌管）。
3.然后用无菌极管取稀释的水样和2个~3个适释度的水样1mL,分别注入灭菌平皿内。之后操作同自来水水样的检验步骤。
结果分析与报告:
计算平均菌落数，首先选择平均菌落在30~300之间者进行计算。
计算方法和报告方式：
一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系：
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水的类别 |
最清洁水 |
清洁水 |
不太清洁水 |
不清洁水 |
极不清洁水 |
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菌落总数CFU/100ML |
10-100 |
100-1000 |
1000-10000 |
10000-100000 |
>100000 |
注意事项
1.菌落总数测定中,应选择合适的稀释度进行(生活饮用水,国家标准规定每毫升不得超过100个,因此以直接吸取1毫升到平板进行培养)
2.各稀释管、相应半皿做好标记。包括:水样名称、稀释度、时间、小组。
3.严格无菌操作进行水样稀释时,每一稀释度均需更换吸管。
4.倾注时,要注意营养琼脂的温度。
5.倾入琼脂后要混匀,待琼脂凝固后倒置培养。
三、总大肠菌群测定
所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、双料乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基
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多管发酵法步骤:
初步发酵试验:采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养24h观察产酸产气情况。
平板分离:对阳性管培养物,接种于伊红美蓝培养基观察菌落特征,并进行革兰氏染色和镜检。
复发酵证实试验:对典型和可疑菌落,接种于乳糖蛋白胨培养液,进行复发酵证实试验。
结果报告(MPN):根据GB5750.12-2006所附检索表报告结果。
初发酵、复发酵试验结果
大肠菌群在EMB平板上的典型特征
大肠菌群革兰氏染色镜检结果
四、耐热大肠菌群测定
所需培养基和试剂：乳糖蛋白胨培养液、EC肉汤、伊红美蓝培养基
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多管发酵法步骤:
初步发酵试验:采用乳糖蛋白培养液36℃±1℃培养24h观察产酸产气情况。
耐热培养:阳性管接种在EC肉汤管中，44.5℃培养24h观察产酸产气情况。
平板培养:阳性管接种在EMB平板上，36℃±1℃培养24h。
结果报告(MPN):根据GB5750.12-2006所附检索表报告结果。
不同细菌在EC肉汤中的生长特征
五、大肠埃希氏菌测定
所需培养基和试剂：EC-MUG培养基
多管发酵法步骤:
耐热培养:将总大肠菌群初发酵中产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌立博球探论坛，接种此类试管中的液体到EC-MUG管中，在培养箱或恒温水浴中44.5℃培养24h。如使用恒温水浴，在接种后30min内进行培养，使水浴液面超过EC-MUG管的液面。
结果报告(MPN):将培养后的EC-MUG管在暗处用366nm紫外灯照射，如有蓝色荧光，则表明水样中含有大肠埃希氏菌。计算EC-MUG阳性管数，根据GB5750.12-2006所附检索表报告结果。
不同细菌在EC-MUG管中的生长特征
生活饮用水中微生物立博球探论坛方法总结
生活饮用水标准检验方法——微生物指标
所需培养基汇总表
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用途 |
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
价格(元) |
备注 |
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1.菌落总数 |
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总数测定 |
HB0109 |
营养琼脂（NA） |
250g |
90 |
干粉型 |
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HBKP0109 |
营养琼脂 颗粒 |
250g |
120 |
颗粒型 |
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HBPM003-6 |
营养琼脂平板 |
9cm*10个 |
50 |
即用型 |
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2.1 总大肠菌群-- 多管发酵法培养基 |
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发酵试验 |
HB0119 |
乳糖蛋白胨培养液 |
250g |
70 |
干粉型 |
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HBKP0119 |
乳糖蛋白胨培养液 颗粒 |
250g |
100 |
颗粒型 |
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HBPT009 |
乳糖蛋白胨培养液（含小导管） |
10ml*20支 |
160 |
即用型 |
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HBPT009-1 |
双料乳糖蛋白胨培养液（含小导管） |
10ml*20支 |
200 |
二倍浓缩 |
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HBPT009-3 |
乳糖蛋白胨培养液（3倍） |
5ml*20支 |
160 |
三倍浓缩 |
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分离培养 |
HB0107 |
伊红美蓝琼脂（EMB） |
250g |
110 |
干粉 |
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HBKP0107 |
伊红美蓝琼脂 颗粒 |
250g |
160 |
颗粒型 |
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HBPM007 |
伊红美蓝琼脂平皿 |
9cm*10个 |
60 |
即用型 |
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镜检 |
HB8278 |
革兰氏染色液 |
5ml*8支 |
40 |
4种成份 |
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2.2 总大肠菌群--滤膜法 |
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分离培养 |
HB0118 |
品红亚硫酸钠琼脂 |
250g |
100 |
干粉型 |
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HBPM019 |
品红亚硫酸钠琼脂平皿 |
9cm*10个 |
100 |
即用型 |
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2.3总大肠菌群--酶底物法 |
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\ |
HB8569-2 |
MMO-MUG |
100g |
960 |
干粉型 |
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3.1耐热大肠菌群--多管发酵法培养基 |
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发酵实验 |
HB0105 |
EC培养基 |
250g |
90 |
干粉型 |
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HBKP0105 |
EC肉汤 颗粒 |
250g |
125 |
颗粒型 |
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HBPT020-1 |
EC肉汤（含小导管） |
10ml*20支 |
160 |
即用型 |
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确证 |
伊红美蓝琼脂 （相关信息见上表） |
||||||
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3.2 耐热大肠菌群-滤膜法 |
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分离 |
HB0154 |
MFC琼脂 |
250g |
160 |
干粉型 |
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确证 |
EC培养基（相关信息见上表） |
||||||
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4.1大肠埃希氏菌--多管发酵法 |
|||||||
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发酵实验 |
HB8559-1 |
EC-MUG培养基 |
100g |
360 |
干粉型 |
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HBPT8559-1 |
EC-MUG培养基管 |
10ml*20支 |
200 |
即用型 |
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4.2大肠埃希氏菌--滤膜法 |
|||||||
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分离培养 |
HB8558-1 |
NA-MUG |
100g |
660 |
干粉型 |
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|
4.3大肠埃希氏菌--酶底物法 |
|||||||
|
\ |
HB8569-2 |
MMO-MUG |
100g |
960 |
干粉型 |
||
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|
|
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|
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|
采水袋 |
CYD004 |
无菌水样采集袋 |
100只/箱 |
500 |
\ |
||
|
CYD005 |
无菌水样采集袋（含0.4mg硫代硫酸钠） |
100只/箱 |
520 |
\ |
|||
广东办事处
罗经理、温小姐
电话：020-87204426 13711177972
邮箱：LWN7972@126.com2
